Et fluorescensmikroskop er en type optisk mikroskop som bruker en lyskilde med høy intensitet for å lyse opp prøven og eksitere fluorokromer i prøven.Belysningen av prøven gjøres vanligvis med en lyskilde som sender ut ultrafiolett lys.De er mye brukt i biologiske, medisinske og industrielle felt.
Hvordan fungerer et fluorescensmikroskop?
Et fluorescensmikroskop bruker en kvikksølv- eller xenonlampe for å produsere ultrafiolett lys.Lyset kommer inn i mikroskopet og treffer et dikroisk speil - et speil som reflekterer ett område av bølgelengder og lar et annet område passere.Det dikroiske speilet reflekterer det ultrafiolette lyset opp til prøven.Noen prøver fluorescerer naturlig under ultrafiolett lys fordi de inneholder fluorescerende stoffer som klorofyll.Hvis prøven som skal ses ikke fluorescerer naturlig, kan den farges med fluorescerende fargestoffer kalt fluorokromer.
Hva består et fluorescensmikroskop av?
1. Lyskilde
De vanligste lyskildene er kvikksølv, xenon og LED.Kvikksølv gir den beste lyskvaliteten for fluorescensmikroskop.LED blir mer populære fordi de er rimeligere enn andre kilder og de bruker mindre strøm.
| Mercury lampe | Xenon lampe | LED | |
| Bølgelengden til det utsendte lyset | 350-370 nm | 400nm ~ 450nm | 400-700 nm |
| Levetid (time) | 200-300 | 400-600 | 10 000 |
| Fordel | 1. Høyintensitetslys, de vanligste lyskildene. 2. Den sender ut sterk ultrafiolett og blåfiolett for å begeistre alle slags fluoroforer. 3. Lyse og fargerike bilder. | 1. Spektralintensiteten er stabil. 2. Sterk spektral intensitet i infrarødt og mellominfrarødt. | 1. Enkel å erstatte. 2. Ingen grunn til å varme opp. 3. Kan slås av og på umiddelbart. 4. Kontroller lyskildens intensitet. |
| Ulempe | 1. En kort levetid. 2. Lang oppvarmingstid. | 1. Spesiell lavspennings likestrømboks er nødvendig for overskuddsvarme. 2. Dyrere enn Mercury Lamp | 1. UV-lys er svakere enn kvikksølvlampe. 2.Hver bølgelengde av lys krever en separat LED på grunn av de smale båndbreddene de sender ut. |
Mercury Fluorescerende Vedlegg
LED fluorescerende vedlegg
2. Eksitasjonsfilter
Eksitasjonsfilteret er avgjørende for driften av et fluorescensmikroskop.Det passerer lyset med en kortere bølgelengde, som det fluorescerende fargestoffet kan absorbere.Dessuten blokkerer den de andre kildene til spennende lys.
Eksitasjonsfilter (B,G,U,V)
3. Dichroic Mirror
Det dikroiske speilet er en type optisk filter som reflekterer lys ved visse bølgelengder mens det overfører andre.Den brukes i fluorescensmikroskoper for å skille eksitasjons- og emisjonsbølgelengdene.
4. Utslippsfilter
Emisjonsfilteret passerer bare bølgelengdene som sendes ut av fluoroforen og blokkerer alt uønsket lys utenfor dette båndet – spesielt eksitasjonsbølgelengdene.
5. Fluorescerende fargestoffer
Fluorescerende fargestoffer er organiske forbindelser som har en egenskap av fluorescens, som gjør at de kan danne et fluorescerende bilde ved å sende ut synlig grønt lys med høy kontrast etter å ha blitt opphisset av det sterkt lysende ultrafiolette lyset.Vanlige brukte fluorescerende fargestoffer er;DAPI (49,6-diamidino-2-phenylindole), akridinoransje, auramin-rhodamin, Alexa Fluors eller DyLight 488.
Hvor mange typer fluorescensmikroskop?
1. Opprettstående epifluorescensmikroskop:
Det er den vanligste typen fluorescensmikroskop.Eksiteringen av fluoroforen og deteksjon av fluorescensen gjøres gjennom samme lysbane (dvs. gjennom objektivet).Flertallet av fluorescensmikroskoper, spesielt de som brukes innen biovitenskap, er av epifluorescensdesign.
BS-2081F Forskningsfluorescerende biologisk mikroskop
2. Konfokalt fluorescensmikroskop:
Konfokalt fluorescensmikroskop: Denne typen fluorescensmikroskop kombinerer laserskanning med fluorescerende belysning for å produsere et bilde.Den kan brukes i et bredt spekter av applikasjoner, som å studere celler og vev, oppdage proteiner og andre stoffer i celler, og måle tykkelsen på materialer.
BS-2081F Forskningsfluorescerende biologisk mikroskop
3. Invertert fluorescensmikroskop
Denne typen mikroskops lyskilde og kondensator er plassert på toppen, vendt nedover.Belysningsvinkelen må være 90 grader i forhold til overflaten på prøven som undersøkes.
BS-2095F invertert fluorescerende mikroskop
Hva er fordelene og ulempene med fluorescensmikroskoper?
Fordeler:
- Muliggjør observasjon av celler i levende organismer uten å skade dem
- Gir høyoppløselige bilder med nøyaktige farger
- Gjør det mulig å studere levende prosesser i celler
- Brukes til å identifisere ulike typer molekyler inne i celler, som proteiner eller nukleinsyrer.
Ulemper:
-Det tillater bare observasjon av spesifikke strukturer inne i en celle merket med det fluorescerende fargestoffet.
- Fotoblekingen på grunn av elektroneksitasjonen under fluorescensprosessen kan påvirke reaktive molekyler i de fluorescerende fargestoffene.Som et resultat kan de reaktive fargestoffene miste sin kjemiske egenskap av fluorescensemisjonsintensitet.
-Cellene er mottakelige for den fototoksiske effekten etter farging med fluorescerende fargestoffer, ettersom fluoroformolekylene absorberer høyenergifotonene fra lyset med kort bølgelengde.
Hva er bruksområdene til et fluorescensmikroskop?
Fluorescensmikroskoper er mye brukt i ulike forsknings- og bruksområder, inkludert biokjemi, cellebiologi, mikrobiologi, immunologi og medisin.
1. I feltet biologi muliggjør fluorescensmikroskopet nøyaktig og detaljert identifikasjon av cellulære og submikroskopiske cellulære komponenter og aktiviteter ved hjelp av fluorescerende fargestoffmerking.
2. I det medisinske feltet kan fluorescensmikroskopet bruke fluorescerende reagenser for å oppdage tilstedeværelse og distribusjon av bakterier og virus, eller for å hjelpe til med å merke kirurgiske mål for å lette kirurgi.
3. Innenfor mineralogien brukes fluorescensmikroskopet ofte for å studere stoffer med spontane fluorescensegenskaper, som asfalt, petroleum, kull, grafenoksid og andre mineraler.
4. I materialvitenskap kan fluorescensmikroskopet brukes i tekstilindustrien eller papirindustrien for å analysere fiberbaserte materialer.
Innleggstid: 14. mars 2023