Fluorescensmikroskopi har revolusjonert vår evne til å visualisere og studere biologiske prøver, slik at vi kan fordype oss i den intrikate verdenen av celler og molekyler.En nøkkelkomponent i fluorescensmikroskopi er lyskilden som brukes til å eksitere fluorescerende molekyler i prøven.Gjennom årene har det blitt brukt ulike lyskilder, hver med sine unike egenskaper og fordeler.
1. Kvikksølvlampe
Høytrykks kvikksølvlampen, som varierer fra 50 til 200 watt, er konstruert av kvartsglass og er sfærisk i form.Den inneholder en viss mengde kvikksølv inni.Når den er i drift, oppstår det en utladning mellom to elektroder, noe som får kvikksølv til å fordampe, og det indre trykket i kulen øker raskt.Denne prosessen tar vanligvis omtrent 5 til 15 minutter.
Utslippet av høytrykkskvikksølvlampen er et resultat av desintegrasjon og reduksjon av kvikksølvmolekyler under elektrodeutladningen, noe som fører til utslipp av lysfotoner.
Den avgir sterkt ultrafiolett og blåfiolett lys, noe som gjør den egnet for spennende ulike fluorescerende materialer, og derfor er den mye brukt i fluorescensmikroskopi.
2. Xenonlamper
En annen ofte brukt hvit lyskilde i fluorescensmikroskopi er xenonlampen.Xenonlamper, som kvikksølvlamper, gir et bredt spekter av bølgelengder fra ultrafiolett til nær-infrarødt.Imidlertid er de forskjellige i eksitasjonsspektra.
Kvikksølvlamper konsentrerer emisjonen i de nesten ultrafiolette, blå og grønne områdene, noe som sikrer generering av lyse fluorescerende signaler, men kommer med sterk fototoksisitet.Følgelig er HBO-lamper vanligvis reservert for faste prøver eller svak fluorescensavbildning.Derimot har xenonlampekilder en jevnere eksitasjonsprofil, noe som muliggjør intensitetssammenligninger ved forskjellige bølgelengder.Denne egenskapen er fordelaktig for applikasjoner som målinger av kalsiumionekonsentrasjon.Xenon-lamper viser også sterk eksitasjon i det nær-infrarøde området, spesielt rundt 800-1000 nm.
XBO-lamper har følgende fordeler fremfor HBO-lamper:
① Mer jevn spektral intensitet
② Sterkere spektral intensitet i de infrarøde og midt-infrarøde områdene
③ Større energiutgang, noe som gjør det lettere å nå objektivets blenderåpning.
3. Lysdioder
I løpet av de siste årene har en ny utfordrer dukket opp innen lyskilder til fluorescensmikroskopi: LED.Lysdioder tilbyr fordelen med rask av-på-svitsjing i millisekunder, reduserer prøveeksponeringstiden og forlenger levetiden til delikate prøver.Videre viser LED-lys raskt og presist forfall, noe som reduserer fototoksisiteten betydelig under langsiktige eksperimenter med levende celler.
Sammenlignet med hvite lyskilder sender LED-er vanligvis ut innenfor et smalere eksitasjonsspektrum.Imidlertid er flere LED-bånd tilgjengelige, noe som muliggjør allsidige flerfarge-fluorescensapplikasjoner, noe som gjør LED-er til et stadig mer populært valg i moderne fluorescensmikroskopioppsett.
4. Lasere lyskilde
Laserlyskilder er svært monokromatiske og retningsbestemte, noe som gjør dem ideelle for høyoppløsningsmikroskopi, inkludert superoppløsningsteknikker som STED (Stimulated Emission Depletion) og PALM (Photoactivated Localization Microscopy).Laserlys velges vanligvis for å matche den spesifikke eksitasjonsbølgelengden som kreves for målfluoroforen, og gir høy selektivitet og presisjon i fluorescenseksitasjon.
Valget av en lyskilde med fluorescensmikroskop avhenger av de spesifikke eksperimentelle kravene og prøvekarakteristikker.Ta gjerne kontakt med oss hvis du trenger hjelp
Innleggstid: 13. september 2023